產品名稱：大腸埃希氏菌志賀毒素核酸檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）
英文名稱：Multiplex PCR Detection Kit for Shiga toxin-producing E.coli (Fluorescent Probe Assays)
產品編號與包裝規格：
| 編號 | 規格 |
| FZ017BF2 | 48 測試/盒 |
產品簡介：本試劑盒僅適用于食品中致病性大腸埃希氏菌（STEC）產志賀毒素類型的定性檢測。
檢測原理：基于Real Time PCR技術，利用針對腸桿菌科的16S rRNA基因和STEC的志賀毒素基因stx1、stx2的引物組、熒光探針以及其他反應優化配置所需試劑，加入待檢樣品核酸即可進行擴增反應。在擴增過程中，熒光探針與目的基因片段結合，可被Taq酶分解并產生熒光信號，此時熒光定量PCR儀可識別該熒光信號，同時根據其強弱變化繪制出相應的實時擴增曲線，進而判定致病性大腸埃希氏菌（STEC）產志賀毒素的類型。
stx1、stx2、16S rRNA基因分別對應熒光報告基團HEX、FAM、Cy5。
大腸埃希氏菌志賀毒素核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)產品組分：
儲存條件與保質期：-20℃儲存，有效期為12個月，避免反復凍融。
靈敏度：最低檢驗限達到 100 CFU/Test
所需其他材料和適用儀器：熒光定量PCR儀（具有能夠檢測HEX、FAM、Cy5標記的熒光通道）、高速離心機、移液器、移液槍頭及離心管等。
大腸埃希氏菌志賀毒素核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)使用指南：
1，樣品前處理
1) 參照 GB 4789.6?2016，使用 1 μL 接種環刮取營養瓊脂平板或斜面上培養 18 h~24 h 的待鑒定的可疑菌落，懸浮到含 30 μL 裂解液的無菌離心管中，充分懸浮菌體，輕彈管壁消除氣泡，99℃加熱 10 min；
2) 12000 r/min 離心 15 min，上清即為粗提的DNA，可轉移至 0.2 mL 無菌離心管中，在-20℃下可長期保存。也可以選擇商業化的細菌基因組提取試劑盒進行提取；
2, 加樣、反應
1) 按照需求取n個PCR反應管（n=1管陰性對照+待檢測樣品數+1管陽性對照），從試劑盒中取出預混液，充分融化，渦旋后短暫離心，以上每管加入20 μL預混液，待用。
2) 向上述n個反應管中分別加入陰性對照、待測樣品DNA、陽性對照各5 μL，總反應體積為25 μL。蓋緊管蓋，短暫離心，立即進行PCR擴增反應。
3) PCR反應體系為25 μL，取HEX、FAM、Cy5檢測通道，在反應階段2中60℃時收集熒光信號，具體程序如下：
| 反應階段 | 溫度 | 時間 | 信號收集 | 循環數 |
| 1 | 95°C | 30 sec | 1 | |
| 2 | 95°C | 5 sec | } 40 | |
| 60°C | 30 sec | ? |
3, 結果：一般情況下，可通過軟件自動設定的基線、閾值等直接讀取檢測結果。如需調整，可根據所使用儀器的自身情況（如噪聲等）以及選取的不同熒光通道進行調整。
1) 質量控制：陰性對照未出現明顯的S型擴增曲線或Ct值＞37，陽性對照出現S型擴增曲線且其Ct值＜30。若陰陽性對照不同時滿足上述條件，則本次檢測結果無效，應重新檢測或與產品技術支持聯系。
2) 結果判讀：（根據反應所得Ct值判讀，具體見下表：）
| Ct值 | 每個基因判讀結果 |
| ≤35 | 對應的基因陽性。 |
| 35~37 | 建議重新檢測，若復測結果Ct≥37，則對應的基因陰性，反之為陽性。 |
| ≥37 | 對應的基因陰性。 |
| 基因檢出情況 | 最終判讀結果 |
| 16S rRNA(+/-)、stx1(-)、stx2(-) | 非STEC |
| 16S rRNA(+)、stx1(+)、stx2(-) | STEC，志賀毒素為stx1 |
| 16S rRNA(+)、stx1(-)、stx2(+) | STEC，志賀毒素為stx2 |
| 16S rRNA(+)、stx1(+)、stx2(+) | STEC，志賀毒素為stx1&stx2 |
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